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【干货】实时荧光定量PCR 实验原理及检测方法

发布时间:2022-07-17 20:46:57 来源:艾尚体育网页 作者:艾尚体育首页    

  实时荧光定量PCR是检测生物样品中DNA、RNA含量的最普遍的方法,通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应软件可以对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度。

  通过荧光染料或荧光标记的特异性探针,对PCR产物进行标记跟踪,通过标准曲线对未知模板进行定量分析。Real-timePCR是在PCR扩增过程中,通过荧光信号,对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期,模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系,所以成为定量的依据。

  在PCR反应体系中,加入过量SYBR荧光染料,SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。

  探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成完全同步。

  4.预实验服务:根据客户提供的目的基因序列或NCBI序列号提供客户引物和探针,并筛选出优化的引物和探针;

  5.正式实验服务:根据预实验筛选的引物和探针对所用样品进行荧光定量PCR的检测,并对结果进行统计和分析。

  实时荧光定量PCR是在定性PCR技术基础上发展起来的核酸定量分析技术。随着分子生物学技术的不断发展,实时荧光定量PCR技术以其便携、快速高效、准确灵敏等优势,越来越受到人们的重视,在环境监测、医学等领域,生物及食品领域等方面具有重要的应用价值。

  2.高特异性和精确性:将DNA杂交的高特异性和光谱技术的高精准性融合,应用荧光探针和光电传导,直接探测基因扩增过程中荧光信号的变化,以获得定量结果,相当于在PCR反应过程中自动完成了Northern杂交;

  3.操作简便、速度快:通过计算机和分析软件实现PCR扩增、产物检测和定量分析一体化;

  4.安全、无污染:FQ-PCR在全封闭状态下进行PCR扩增和产物分析,杜绝了传统PCR开放检测对环境的污染和由此导致的假阳性;

  5.结果观测重复性好:一起在线实时观测,结果判断直观,避免人为因素干扰。返回搜狐,查看更多

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